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专利名: |
连续发酵或半连续发酵生产丁二酸的方法 |
专利号: |
CN200810123545.6 |
关键字: |
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专利类别: |
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使用范围: |
连续发酵或半连续发酵生产丁二酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)在以甘蔗糖蜜、玉米淀粉糖浆、菊芋水解糖浆、甜高粱秸秆糖浆及纤维质木质原料水解糖浆等碳水化合物原料连续或半连续制备丁二酸方法中的应用。本发明的方法利用多级连续发酵或两级半连续发酵可以提高菌体浓度和细胞活力,可获得高的丁二酸产量和高的丁二酸生产强度;容易实现自动化、连续化操作;较分批发酵可节约反复洗罐、灭菌等非发酵时间,因而生产效率可以大大提高;利用半连续发酵生产丁二酸较连续发酵更容易控制发酵参数,糖利用率、目标产物产率和目标产物产量高,设备及操作简单易行, |
申报人: |
孙志浩,过鑫富,郑 璞,倪 晔,董晋军 |
申报单位: |
江南大学 |
申报时间: |
6/6/2008 |
专利有效期限: |
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专利内容
申请(专利)号:
CN200810123545.6
申请日期:
2008-6-6
公开(公告)日:
2008-11-12
公开(公告)号:
CN101302546
主分类号:
C12P7/46(2006.01)I,C,C12,C12P,C12P7
分类号:
C12P7/46(2006.01)I,C12N1/20(2006.01)I,C12R1/01(2006.01)N,C,C12,C12P,C12N,C12R,C12P7,C12N1,C12R1,C12P7/46,C12N1/20,C12R1/01
申请(专利权)人:
江南大学
发明(设计)人:
孙志浩,过鑫富,郑 璞,倪 晔,董晋军
主申请人地址:
214122江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院
专利代理机构:
无锡市大为专利商标事务所
代理人:
时旭丹,刘品超
国别省市代码:
江苏;32
主权项:
1.一种连续发酵或半连续发酵生产丁二酸的方法,其特征在于,步骤为:A.种子的制备菌株:琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC1593,为本实验室从肉牛的瘤胃中分离获得,保藏在中国北京中关村中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,且已公开,公开号CN1814747A,公开日2006年8月9日;种子培养基的组成为:葡萄糖5-15g,酵母膏1-10g,K2HPO4·3H2O 0.5-2.0g,NaH2PO4·2H2O 0.2-2.0g,去离子水定容至1000mL;将CGMCC1593菌株接种到种子培养基中,于30-40℃在充满CO2的环境中静止或振荡培养24-60h;B.连续发酵:发酵培养基以g/L计:总糖20-60,酵母膏0-20,玉米浆0-20,Na2HPO4·12H2O 1.5,NaH2PO4·2H2O 1.5,调节培养基pH 5.5-7.5;(1)单级连续发酵:按2%-10%的接种量将培养好的种子接入发酵罐进行培养,发酵罐体积V,当培养5-24h达到恒定的生长状态后,按0.06-0.65V/h流速恒速补加新鲜发酵培养基到发酵罐中,控制稀释速率为0.06-0.65h-1,并且以0.06-0.65V/h相同流速从发酵罐中抽出发酵液到储料罐;或(2)多级连续发酵:按2%-10%的接种量将培养好的种子接入一级发酵罐进行培养,发酵罐体积V,当培养5-24h达到恒定的生长状态后,按0.06-0.65V/h流速恒速补加新鲜发酵培养基到一级发酵罐中,并且以0.06-0.65V/h相同流速从一级发酵罐抽出发酵液或以差压将一级发酵罐中的发酵液流入二级发酵罐,再继以相同方式将前一级发酵罐中的发酵液流入后一级发酵罐,直至发酵成熟,合计2-6级连续发酵,成熟发酵液流入或压入储料罐;每一级的发酵培养条件为:发酵温度维持30-40℃,用100%CO2气体保持罐压力0.01-0.10MPa,控制每一级发酵罐的稀释速率为0.06-0.65h-1,必要时采用机械搅拌方式使物料均匀混合,用碱溶液调节维持发酵液pH 5.5-7.5;或C、半连续发酵:发酵培养基及一级补料培养基组分AM1以g/L计:总糖30-75,酵母膏0-20,玉米浆0-20,Na2HPO4·12 H2O 1.5,NaH2PO4·2H2O 1.5,调节培养基初始pH 5.5-7.5;二级罐补料培养基AM2组分以g/L计:总糖75-150,酵母膏0-20,玉米浆0-20,Na2HPO4·12 H2O 1.5,NaH2PO4·2H2O 1.5,调节培养基初始pH5.5-7.5;(1)单级半连续发酵:单级半连续发酵在1只发酵罐和1只补料罐中进行,按2%-10%的接种量将培养好的种子接入发酵罐进行培养,在发酵温度30-40℃,搅拌转速200转数/分钟,通100%CO2气体保持罐压,并用碳酸盐或碱溶液调节维持发酵液pH 5.5-7.5,发酵8-16h后,放出占初始装液体积50%-80%的料液到储料罐中;向发酵罐中补入与放料液体积相同的补料培养基AM1,开始进行新一轮培养,相同条件下进行发酵,发酵8-16h后,放出占初始装液体积50%-80%的料液,下一批次继续重复以上操作,共进行15轮以上半连续发酵;或(2)两级双流半连续发酵:一级罐培养与发酵,按2%-10%的接种量将培养好的种子接入一级发酵罐进行培养,发酵条件同单级半连续发酵,发酵4-16h后,放出占初始装液体积50%-80%的料液到二级罐中的一只发酵罐中,放出料液体积为V;二级发酵罐有2-3个,之后马上在二级罐补加1-3倍V体积的二级罐补料培养基(AM2),同时向一级罐补入V体积的一级罐补料培养基(AM1),开始新一轮培养;当二级罐发酵10-20小时后,二级罐抽出全部发酵液到储料罐后,再重复进行新一轮培养;共进行35轮以上两级双流半连续发酵。
法律状态:
公开 ,实质审查的生效
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